染料木素抗肿瘤作用分析论文

2020-06-23实用文

  【摘要】目的观察染料木素的体外抗肿瘤作用。方法采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)检测法测定染料木素对子宫内膜腺癌细胞系(JEC)、人肝癌SMMC-7721细胞系体外增殖的影响,按台盼蓝排染法计数活细胞,绘制细胞生长曲线。结果MTT法检测显示,染料木素对JEC细胞和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用呈现剂量和时间依赖性;随染料木素浓度的升高,JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线逐渐下移,10-4mol·L-1的染料木素作用下的JEC细胞生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。结论染料木素具有一定的抗肿瘤作用。

  【关键词】染料木素肿瘤细胞生长

  1材料与方法

  1.1MTT检测法

  1.1.1肿瘤细胞的传代培养子宫内膜腺癌(JEC,遵义医学院微生物学教研室吴中明教授提供)、人肝癌SMMC7721(中科院上海生命研究院)用含10%小牛血清的RPMI-1640(Lot#1165062,GIBCO)培养液稀释成1×105·ml-1的细胞悬液,每个培养瓶2ml,置37℃、5%的CO2环境中进行体外培养,待瘤细胞在培养瓶底长至约80%细胞融合时,分瓶传代培养。

  1.1.2分组实验分为空白对照组(NS)、阳性对照组(5-fliorouracil,5Fu,10-4mol·L-1。上海旭东海普药业有限公司,批号:031001),5个10倍梯度的试药组(10-4~10-8mol·L-1的染料木素,﹥95%,陕西赛德高科生物股份有限公司)和与10-4mol·L-1的染料木素相对应的'溶媒对照组(含0.5%乙醇的NS)。

  1.1.3操作用RPMI-1640完全培养液分别将肿瘤细胞稀释配制成5×104·ml-1的细胞悬液,接种于96孔培养板,每孔100μl,置37℃,5%的CO2环境中,进行体外培养,24h后加药,每孔10μl,设5个平行孔,空白对照组加入等量生理盐水;结束培养(24,48,72,96h)前4h,每孔加入5mg·ml-1的MTT溶液10μl,结束培养后小心吸弃上清液,每孔加入DMSO150μl,待甲臢完全溶解后于酶标仪(Sunrise,Australia)570nm处读出各孔的OD值。实验重复3次。

  1.1.4评价指标评价指标为平均细胞抑制率(IR)。细胞抑制率(%)=(1一实验孔OD值/对照孔OD值)×100%。IR>50%为敏感,在30%~50%为低度敏感,小于30%为不敏感。

  1.2台盼蓝排染法及生长曲线的绘制将对数生长期细胞制成浓度为5×104·ml-1细胞悬液,接种于24孔板,每孔1ml。置37℃,5%的CO2环境中培养24h,再行无血清培养48h。更换完全培养基,每孔加入药物100μl(空白对照组加等体积的生理盐水),每组各时间点均设2个平行孔。分别于药物作用1~7d,消化收集细胞,按台盼蓝排染法,用血细胞计数板在光镜下计数活细胞数。以时间为横坐标,活细胞数为纵坐标,绘制细胞生长曲线。

  1.3统计学处理实验所得数据用±s表示,采用t检验进行各组间比较。

  2结果

  2.1MTT检测

  2.1.1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示,随染料木素浓度的增加和时间的延长,染料木素对JEC细胞生长的抑制作用逐渐增强。结果见表1。其中,10-4mol·L-1的染料木素作用JEC细胞24,48,72和96h的抑制百分率分别为36.10%,55.00%,58.73%和62.21%,与5Fu间无显著差异(P>0.05)。表1染料木素对JEC细胞体外增殖的影响(略)

  2.1.2染料木素对SMMC-7721细胞体外增殖的影响MTT检测结果显示,随着染料木素浓度的增加和时间的延长,染料木素对SMMC-7721的抑制作用逐渐增强。结果见表2。表2染料木素对SMMC7721细胞体外增殖的影响(±略)

  2.2染料木素对JEC和SMMC-7721细胞生长的影响

  2.2.1染料木素对JEC细胞生长的影响染料木素对JEC细胞的生长曲线显示,随着染料木素浓度的增加,生长曲线逐渐下移,10-4mol·L-1染料木素的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势。见图1。

  2.2.2染料木素对SMMC-7721细胞生长的影响染料木素对SMMC-7721细胞的生长曲线显示,随着染料木素浓度的增加,生长曲线逐渐下移。见图2。

  3讨论

  MTT检测结果显示,染料木素对JEC和SMMC-7721细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用,呈现剂量和时间依赖性。其中,在96h10-4mol·L-1的染料木素对JEC细胞的抑制百分率达62.21%,对SMMC-7721细胞的抑制百分率为31.87%。表明染料木素对JEC细胞敏感,对SMMC-7721低度敏感。该结果与染料木素对胃癌HGC227细胞系[6]、人肺癌细胞A549和人低分化胃腺癌细胞BGC-823[7]等的抑制作用相似。随着染料木素浓度的增加,JEC和SMMC-7721细胞的生长曲线均逐渐下移。其中,在10-4mol·L-1的染料木素作用下,JEC细胞的生长曲线呈现与5Fu相似的下降趋势,进一步表明染料木素具有一定的抗肿瘤作用。

  染料木素是一种很有潜力的癌症化学预防剂,来源丰富,作用复杂,受到广泛关注。研究表明,染料木素具有雌激素作用、抗氧化作用以及抑制拓朴异构酶活性、抑制酪氨酸蛋白激酶活性、诱发细胞程序性死亡、抑制血管生成[2]等作用,但仍不能完全阐明其作用机制。染料木素抗肿瘤的机制有待深入研究。

  【参考文献】

  [1]WisemanH.RoleofDietaryPhyto-oestrogensintheProtectionAgainestCancerandHeartDisease[J].BiochemSocTrans.1996,24(3):795.

  [2]郑杰.金雀异黄素[J].国外医学·卫生学手册,1998,25(5):260.

  [3]PollardM,etal.InfluenceofIsoflavonesinSoyProteinIsolatesonDevelopmentofInducedProstate-relatedCancersinL-WRats[J].Nutr-Cancer.1997,28(1):41.

  [4]张义,赵春燕,孙亚芹,等.大豆异黄酮的抗肿瘤研究[J].长春中医学院学报,2006,24(1):60.

  [5]AnnRKennedy:TheEvidenceforSoybeanProductsasCancerPreventiveAgents[J].J.Nutr.1995,125:733.

  [6]MatsukawaY,MaruiN,SakaiT,etal.GenisteinarrestscellcycleprogressionatG2-M[J].CancerRes,1993,53(6):1328.

  [7]马磊,楼凤昌.槐角中的抗癌活性成分[J].中国天然药物,2006,4(2):151.

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