一、微生物镜下观察
G氏染色
步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
涂片 与单染色法相同。
固定 与单染色法相同。
结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。
碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。
酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止，然后立即水洗，并吸干。
番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。
镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌;菌体显红色的为革兰氏阴性菌。
SRB为革兰氏阴性菌
二、厌氧型为生物的培养
1.SRB菌
采用
Hungate厌氧操作技术、绝迹稀释法以及“滚管”培养对样本进行分离，多次纯化获得纯菌株SRB。
具体方法：向改良后Starkey培养基中加入0.2%的刃天青溶液，培养基煮沸后，加入L-半光盐酸盐0.5g，通入高纯氮气驱氧30min，121℃灭菌20min，固体培养基加入16%的琼脂糖。
单独配 3%的FeSO4?(NH4)2 SO4 厌氧
SRB菌株于液体培养基中37℃培养48h 后, 在Olympus COVER-018光学显微镜下革兰氏染色观察。
2.DNB菌
方法同
SRB菌，PH值最好在7，
药品：
(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO4?7H2O 0.5g,
Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO4?7H2O 8.0 g, 蒸馏水1 000 mL
121℃灭菌15 m in。
恒温摇床培养箱振荡培养
由于此项操作开始时间较晚，至实习结束，菌落还未完成一个完整周期的培养。
三、水生细菌的计数
1.血球板计数法
取样：先清洗一个容量为100毫升的取样瓶或烧杯。取样前轻轻轻振荡试管搅拌，待分布均匀后，立即用注射器针管取样，取样的量为1毫升。加蒸馏水100倍稀释。
样品放于计数板：放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干，不能有油污染和杂质。将血球计数板平放在桌子上，盖好盖玻片;然后把样品瓶轻轻摇动几下，菌分布均匀，并立即用干净的微吸管取样品，迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处，轻压微细吸管的橡皮帽，使样品流入计数板内。注意控制样品流入量，不能过多，过多则流入到沟内;也不能过少，过少则计数时不准确，应充满画线方格及其周边部分。还应注意盖玻片下不能有气泡存在，否则会造成计数不准确。样品吸入血球计数板后，稍停1分钟，待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。
计数：计数中央大格的4个角的中格，每个中格有25个小格，逐一计数，4个中格相加共计数100个小格。计数时应从计数框一角开始，在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则，计数出细菌的总量后，按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量：细菌数量=100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。